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龙葵SorMT2a和SorMT2c基因的克隆及其转化烟草研究.doc
文档介绍:
龙葵SorMT2a和SorMT2c基因的克隆及其转化烟草研究摘要:以龙葵为试验材料,利用RT-PCR技术分离到2个长度不同的编码Ⅱ类MT(金属硫蛋白)的CDNA克隆SorMT2a(EU760481)和SorMT2c(EU760483),成功构建植物表达载体pROKⅡ-SorMT2a和pROKⅡ-SorMT2c,通过农杆菌介导法转化烟草并通过PCR验证了基因的表达情况。与野生植株相比,转SorMT2a和SorMT2c基因烟草对镉的耐受性不同,有的转SorMT2a基因植株在MS培养基中的CdCl2浓度达到200μmol/L时仍然生长良好,生物量和株高均大于野生型植株;而转SorMT2c基因植株对镉的耐受性没有提高。这说明SorMT2a基因在植物对镉的耐受性中起作用,而SorMT2c基因则不起作用,从而也说明了同一类基因不同家族可能具有不同功能。本文来源于网络,本站发布的论文均是优质论文,供学习和研究使用,文中立场与本网站无关,版权和著作权归原作者所有,如有不愿意被转载的情况,请通知我们删除已转载的信息,如果需要分享,请保留本段说明。关键词:龙葵;金属硫蛋白;重金属;RT-PCR;SorMT2a;SorMT2c 中图分类号:Q785;Q949.777.7 文献标识号:A 文章编号:1001-4942(2010)12-0001-05 金属硫蛋白(Metallothionein,MT)是一类富含半胱氨酸、不含组氨酸和芳香族氨基酸、无二硫键的小分子细胞内金属结合蛋白,在重金属解毒和重金属稳态维持中具有重要作用,是首次从马的肾脏中分离出来并命名的。植物金属硫蛋白的发现相对较晚,目前已分离纯化的植物金属硫蛋白只有小麦Ec蛋白和拟南芥的MT1、MT2和MT3。很多研究表明,MTmRNA的累积量与某些金属离子的诱导呈正相关。迄今为止,在拟南芥、水稻、小麦、大豆、棉花、玉米、番茄、辣椒、马铃薯等植物中均克隆到了MT基因cDNA或基因组序列。转小鼠MT的烟草中,接近20%的植株可以在200μmol/L镉下正常生长,而对照野生烟草在10μmol/L镉下生长便受到严重抑制。将麦瓶草的MThis转到烟草中,提高了其根和叶对镉的积累量。龙葵(SolanumnigrumL)属茄科茄属龙葵亚属植物,是我国新近发现的一种重金属镉超积累植物。近年来,人们对龙葵的研究主要集中在镉耐受性和生理特性方面,而对与龙葵镉耐受有关的基因――金属硫蛋白基因的克隆和研究,目前尚未见报道。本研究经同源克隆获得了龙葵2个长度不同的Ⅱ类金属硫蛋白基因的cDNA序列SorMT2a和SorMT2c,并将其转到烟草中,分析了其对植物镉耐受性的作用,为研究龙葵MT基因的功能奠定了基础,并为运用植物修复技术清除土壤中的镉提供了理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料植物和菌株:龙葵和烟草种子由山东省农业科学院高新技术研究中心提供。克隆载体pMD18-TVector购自TAKARA中版四柱预测马报彩图。大肠杆菌DH5a、农杆菌LBA4404及植物表达载体pROKⅡ由山东省农业科学院高新技术研究中心保存。主要工具酶及试剂盒:总RNA抽提试剂盒(北京GenStar)、反转录试剂盒(TransGenBio-tech)、DNA凝胶回收试剂盒(北京百泰克)、质粒提取试剂盒(北京百泰克)、限制性内切酶XbaI和kpnI及连接酶T4DNALigase( 内容来自淘豆网www.转载请标明出处.